一、MLPA核心原理一句話概括

MLPA通過設計一對特殊的、靶向相鄰DNA序列的探針，只有當這對探針同時與靶序列wanmei結合時，才能連接成一個完整的模板，隨后被通用引物擴增并定量。擴增產(chǎn)物的量直接反映了靶序列的拷貝數(shù)。

二、 MLPA檢測原理分步詳解

下面，我們來詳細解讀流程中的每一個關鍵步驟：

 第1步：探針雜交

   一對探針：針對每一個待檢測的靶位點，都設計有兩條非常短的寡核苷酸探針。

       左探針：包含一段靶序列特異性雜交序列 + 一段通用的“引物結合"序列X。

       右探針：包含一段靶序列特異性雜交序列 + 一段長度不等的“填充序列" + 一段通用的“引物結合"序列Y。

   特異性結合：將這一對探針與變性后的樣本DNA混合。它們會尋找并精確地雜交到目標DNA上相鄰的位置（通常只間隔1個核苷酸）。

 第2步：連接反應（最關鍵的一步）

   “連接依賴"的核心：只有當左、右探針都wanmei地與靶DNA結合并緊密相鄰時，連接酶才能將它們共價連接成一條完整的、長的DNA模板。

   嚴苛的質(zhì)控：如果靶序列缺失（拷貝數(shù)為0）或發(fā)生點突變導致探針無法結合，連接反應就不會發(fā)生。這確保了后續(xù)信號的特異性，避免了假陽性。

 第3步：PCR擴增

   通用引物擴增：使用一對針對所有連接產(chǎn)物上通用序列X和Y的引物進行PCR擴增。

   產(chǎn)物長度各異：由于每個右探針的“填充序列"長度不同，因此每個靶位點對應的最終PCR產(chǎn)物都具有獨特的長度（就像不同大小的“條形碼"）。

 第4步：毛細管電泳分離與定量

   按長度分離：將所有PCR產(chǎn)物進行毛細管電泳，嚴格按照片段長度進行分離。

   熒光檢測：PCR引物或探針上標記有熒光基團，因此每個長度的片段會產(chǎn)生一個熒光信號峰。

 第5步：數(shù)據(jù)分析

   峰高/面積 = 相對拷貝數(shù)：通過軟件分析每個峰的高度或面積。將其與同一反應中多個內(nèi)參基因（已知為二倍體，拷貝數(shù)穩(wěn)定）的峰進行比較。

   結果解讀：

       正?？截悢?shù)（2份）：靶位點峰高與內(nèi)參峰高比值約為1.0。

       缺失（1份或0份）：比值約為0.5或0。

       重復/擴增（3份或以上）：比值約為1.5或更高。

三、 MLPA原理的獨特優(yōu)勢

1.  高通量：單次反應可輕松檢測40-50個不同的靶位點。

2.  高特異性與準確性：依賴“雙探針wanmei結合"的連接步驟，如同雙重校驗，極大減少了非特異性擴增。

3.  對DNA質(zhì)量要求低：因為探針很短（~50-70 nt），即使DNA部分降解（如FFPE樣本），也能有效雜交和連接，而長片段PCR則會失敗。

4.  可檢測甲基化（MS-MLPA）：通過對右探針的雜交序列進行HhaI酶切位點設計。如果靶序列被甲基化，酶切被阻止，探針可連接擴增；如果未甲基化，酶切斷開探針，無法擴增。通過比較酶切處理與未處理的信號，即可判斷甲基化狀態(tài)。

四、與其他技術的核心區(qū)別

總結來說，MLPA的原理精髓在于其“連接依賴"和“長度編碼"的設計，使其成為檢測已知基因拷貝數(shù)變異和甲基化的一種高度多重、精準且經(jīng)濟高效的技術，特別適用于臨床診斷和大規(guī)模篩查。

MLPA技術專家——MRC HOLLAND代理---天津益元利康生物科技有限公司，歡迎咨詢選購。

益元利康有限公司是一家專注于生命科學實驗室快速消耗品為主營方向的生命科技企業(yè)，提供完整的產(chǎn)品和服務體系，為廣大的科研用戶提供實驗室一站式服務。益元利康已成為多家生物品牌的代理商，如ALZET、MedKoo、EZB、WaKo、Zymo research、Qiagen等，為用戶提供完善的產(chǎn)品、專業(yè)的咨詢，助力推動中國生命科學研究快速發(fā)展。

荷蘭MRC部分產(chǎn)品目錄：